甘草多糖研發

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于教授談免疫-甘草多糖-康奇膠囊-康奇生物

  一、腫瘤材料

  人大細胞肺癌細胞H460,購自中國科學院上海生命科學研究院

  二、試驗目的

  觀察灌胃給予GPComplex甘草多糖對人源肺癌H460細胞小鼠體內移植模型的作用,對環磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的調節作用,從抑制腫瘤生長、提高免疫方面初步評價GPComplex甘草多糖的抗腫瘤作用,探索劑量反應關系、程度等,并大致判斷其是否具有毒性、程度及劑量反應關系,為甘草多糖后續開發提供藥效學依據。

  三、試驗方法

  1. 采用人肺癌H460細胞小鼠皮下移植模型,觀察GPComplex甘草多糖對腫瘤生長的抑制作用。選用Balb/c-nu雌性小鼠,接種H460腫瘤組織塊,待小鼠體內接種的腫瘤生長至100mm3左右時,依腫瘤體積分為對照組、甘草多糖高劑量(1 g·kg-1)組、中劑量(0.5 g·kg-1)組、低劑量(0.25 g·kg-1)組、紫龍金(3 g·kg-1)組、索拉菲尼(50mg·kg-1)組,每組7只。分組后隨即每天灌胃給藥1次,對照組給予去離子水,共持續32天,于末次給藥后次日取血后脫頸處死取腫瘤稱重。試驗期內每周2次測量腫瘤體積及動物體重。

  2. 選用ICR雄性小鼠,隨機分為對照組,模型組,紫龍金(3 g·kg-1)組、甘草多糖高劑量(1 g·kg-1)組、中劑量(0.5 g·kg-1)組、低劑量(0.25 g·kg-1)組,每組10只。分組后即開始每天灌胃給藥1次,對照及模型組給予去離子水,共給藥14天。給藥第6、7天時,除對照組外,其余各組小鼠均腹腔注射環磷酰胺80mg·kg-1,第15天眼眶靜脈叢取血,EDTA抗凝,用于淋巴細胞亞群分析:CD3+(T細胞)、CD3+CD4+(輔助性T細胞和遲發超敏性T細胞)、CD3+CD8+(抑制性T細胞和殺傷性T細胞)、CD3-CD19+(B細胞)、CD3-CD335+(NK細胞),統計各陽性細胞占淋巴細胞的百分比,并計算CD4/CD8的比值。

  四、試驗結果

  圖1甘草多糖對腫瘤H460體內增殖模型的影響

  1. 試驗結果顯示,甘草多糖各劑量組的相對腫瘤體積RTV與對照組比較雖均無明顯差異,但1 g·kg-1給藥32天可使抑瘤率超過30%,達30.5%,且對小鼠體重無明顯影響,提示甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠體內生長的趨勢,且無明顯毒副作用。而紫龍金3 g·kg-1給藥32天抑瘤率僅為13.3%,且相對腫瘤體積RTV與對照組比較無顯著差異,提示在該劑量及給藥周期下,紫龍金無明顯抑制人源肺癌H460小鼠體內生長的作用。具體結果見表1-表3和圖1。

  2. 試驗結果顯示,與正常小鼠比較,模型組小鼠給予環磷酰胺后,CD3、CD4、CD8、CD19陽性細胞比例明顯下降,CD335陽性細胞比例明顯升高,提示T、B淋巴細胞均明顯降低,小鼠免疫功能明顯下降。與模型組比較,甘草多糖1 g·kg-1給藥14天明顯升高CD3、CD4陽性細胞比例,降低CD335陽性細胞比例,逆轉環磷酰胺的不利影響,提示甘草多糖具有明顯促進T淋巴細胞增殖,提高機體免疫功能的藥理活性。具體結果見表5。

  五、試驗結論

  1. GPComplex甘草多糖在0.25~2 g·kg-1劑量范圍內,灌胃給藥32天具有抑制人源肺癌H460小鼠體內生長的趨勢。

  2. 在環磷酰胺所致免疫功能低下模型中,GPComplex甘草多糖1 g·kg-1灌胃給藥14天,具有升高CD3、CD4陽性細胞比例,降低CD335陽性細胞比例,促進T淋巴細胞增殖,提高小鼠的免疫功能。

  參考文獻:

  [1] 細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床評價的技術指導原則,20080820頒布.

  [2] 魏偉, 吳希美, 李元建. 藥理實驗方法學. 第4版. 北京: 人民衛生出版社, 2010.

  [3] 陳奇. 中藥藥理研究方法學. 第3版. 北京: 人民衛生出版社, 2011.

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